O Disque 100 funciona diariamente, 24 horas por dia, incluindo sábados, domingos e feriados. As ligações são gratuitas e podem ser feitas de qualquer telefone fixo ou móvel em todo o Brasil. Qualquer pessoa pode registrar denúncia sobre violações de direitos humanos das quais seja vítima ou tenha conhecimento.
As informações recebidas são analisadas pelo MDHC e encaminhadas aos órgãos responsáveis pela proteção e responsabilização. O governo federal também mantém o Sistema Ipê, canal específico para denúncias de trabalho análogo à escravidão disponível na internet, no qual o denunciante não precisa se identificar e pode fornecer o maior número possível de informações.